對于細胞培養(yǎng)而言，血清的重要性顯而易見。它含有包括生長因子在內的蛋白、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他成份，可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。胎牛血清（FBS）是細胞培養(yǎng)常用的血清。

隨著生物學研究的迅猛發(fā)展，對血清的需求也越來越多，加上進口運輸成本增加等等各種原因，進口血清的價格在國內也是悄悄地蹭蹭地，站到了“不菲”的價位。

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產生毒性作用。血清經過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經滅活直接用于細胞培養(yǎng)。

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時最好現置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，常用是10％。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉化。 采購血清時，最好先從供應商處索取樣品進行試驗，選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經過預先試驗的樣品代替。

 

與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢？重點有二！

其一：關系到沉淀出現的幾率！

記得嗎？血清在融化過程中，瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時的亮線，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區(qū)別，你懂得！）試想，如果采用4℃過夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大約需要10小時左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此時就很容易有一些蛋白飽和析出，（大多是脂蛋白和纖連蛋白），這就是血清融化中產生沉淀的重要原因之一。

采用三步法，只要2.5個小時，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時間，而且最大限度減少了血清沉淀出現的幾率。

 

血清融化過程中，蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白

其二：血清在培養(yǎng)細胞中，最重要的是利用它的活性的因子，因此，融化過程中最大限度地保留因子的活性，就變得非常重要。回憶一下，細胞復蘇時，要保持細胞的活性，我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢？快融！血清同樣如此！三步法需要兩個半小時，4℃過夜需要大約10個小時（冰箱一般設2-8℃，所以各實驗室融化時間會稍有出入）。哪個速度對保留活性更好？不言而喻！

下面，我們詳細解讀『血清的三步融化法』的步驟：

 

圖：剛從-28℃拿出的血清，是這個樣子的

融化血清第一步

溫度：室溫

時間：100ml - 35分鐘

500ml - 90分鐘

1000ml - 100分鐘

或

溫度：15-20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下）

時間：100ml - 5分鐘

500ml - 18分鐘

1000ml - 20分鐘

 

圖：這是最近Ausbian血清的大區(qū)經理周博，在天津血研所實驗室拍到的——實驗人員三步法化血清的圖片，為了節(jié)約時間，實驗人員采取的是第一步20℃水浴18min的方法。（用現接的自來水放入冰凍的血清，即可達到20℃水浴的效果。一般實驗室沒有能制冷到20℃的水浴鍋）

融化血清第二步

溫度：20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下）

時間：100ml - 15分鐘

500ml - 25分鐘

1000ml - 30分鐘

 

圖：第二步，仍舊是新接的自來水浴，25min

融化血清第三步

溫度：37℃水浴

時間：100ml - 20分鐘

500ml - 35分鐘

1000ml - 45分鐘

 

第三步，將血清置于37℃水浴鍋中進行融化，大約30nmin左右，血清就*融化，可以分裝了。

 

 

圖：大家看，使用三步法融化的血清十分清亮，養(yǎng)細胞的效果也是棒棒噠。

注意

1.在水浴過程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動，使血清混勻，但不要產生泡沫！

2.胎牛血清不推薦熱滅活。

3.此三步法適用于所有品牌、所有級別的進口或國產血清，均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細胞培養(yǎng)效果方面，得到不同程度的提高！

看到這里，你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢？其實，想快速得到高品質的血清，除了科學的融化方法，自身品質出眾的血清，完備的運輸冷鏈，貼心的售后服務，這些都是*的！

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經過嚴格質控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產日期，保質期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物”網站，留言技術部，得到免費幫助。）

 

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