培養(yǎng)細胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、器皿或其他容器，生存空間及營養(yǎng)是有限的。當細胞增殖到一定密度后，分離出一部分細胞和更新營養(yǎng)液，使細胞更好地生存，這一過程稱之為“傳代"(passage或subculture)。

值得注意的是：每次傳代細胞在生長和增殖方面受到一定的影響。

生命期

指細胞在培養(yǎng)過程中持續(xù)增殖和生長的時間。一般根據(jù)細胞種類、性狀和原供體的年齡的情況而定。

如：二倍體成纖維細胞，在不凍存和反復傳代條件下可傳30～50代，相當于150～300個細胞增殖周期，能維持一年左右的生命，細胞便開始凋亡(apoptosis)。 細胞在生存過程中經(jīng)歷以下三個階段

1.原代培養(yǎng)期(primary culture)

細胞培養(yǎng)

組織到第一次傳代時間大約為1～4周

特點：

細胞移動活躍,但分裂不旺盛,多呈二倍體核型。

原代與體內(nèi)原組織形態(tài)結構和功能活動基本相似。

各細胞的遺傳性狀互不相關，細胞相互依存性強，如果把這種稀釋分散成單細胞,在軟瓊脂培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),細胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降，表明細胞獨立生存性差。

2.傳代期(passage)

初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代便稱之為細胞系(cell line)

特點：

細胞增殖旺盛，并維持二倍體核型，也叫二倍體細胞系(diploid cell line)為了保存二倍體細胞性質，細胞應在初代或傳代早期凍存為好。

一般細胞在10代以內(nèi)凍存。

凍存配方：

向培養(yǎng)液加入保護劑二甲基亞砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

存于在液氮中溫度可達到－196℃，可長期儲存。如解凍后細胞復蘇，仍能繼續(xù)增殖生長，細胞性狀不受影響，成為保存細胞最主要的手段。

3.衰退期

特點：細胞仍生存 增殖減慢 不增殖 輪廓增強 衰退凋亡

注意：細胞在三期中的任何一期（一般發(fā)生在傳代后期或衰退期）在某些因素影響下,如血清質量不佳、病毒污染、溫度和pH不穩(wěn)等,細胞可能發(fā)生自發(fā)轉化(spontaneous transformation);

細胞可能獲得永生性(immortality) 或稱為惡性性(malignancy)。細胞獲得持久性的增殖能力,這樣的細胞群體稱為連續(xù)細胞系(continuous cell line)。而細胞獲得不死性后,細胞核型大多變成異倍體(heteroploid)接觸抑制消失。

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