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細胞培養(yǎng)時用到的牛血清您了解多少?

更新時間:2022-01-17  |  點擊率:995

牛血清的質(zhì)量要求

(一)WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求

1. 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。

2.有些國家還要求牛血清來自沒有用過反芻動物蛋白飼料喂養(yǎng)的牛群。

3.要能證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。

5.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無大腸桿菌噬菌體污染。

6.要求血清對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國在對牛血清的質(zhì)量標準最早在2000年版《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》中提出。包括物理性狀、總蛋白,血紅蛋白、細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。2005版藥典頒布之后,小牛血清質(zhì)量標準被納入《中國藥典》2005年版 第三部 生物制品分冊。

 

科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。

 

 

有下列情況者,對血清內(nèi)毒素應格外留意篩選:

1.養(yǎng)干細胞時,干細胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。

2.養(yǎng)免疫細胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。

3.基因敲除相關的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關重要;

4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實驗順利的第一步。

5.實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。

 

總之,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數(shù)據(jù)不準,或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。

細胞培養(yǎng)學會均依據(jù)內(nèi)毒素對血清的品質(zhì)進行分級和命名。

 

 

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