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從以往PCR對(duì)支原體污染的檢測(cè)報(bào)道看方法驗(yàn)證的必要性

更新時(shí)間:2020-11-12  |  點(diǎn)擊率:932

PCR為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)自1988年發(fā)明以來(lái),已廣泛應(yīng)用于科研和臨床,但用于生物制藥則較晚,這是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)化的建立需要一定的時(shí)間。

 

國(guó)外已有不少藥廠將PCRqPCR用于工業(yè)放行檢測(cè)中的支原體檢查。PCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)的潛在可能。但需要按步驟和程序開(kāi)展方法驗(yàn)證。

 

有作者指出,有些PCR法在反應(yīng)條件及引物設(shè)計(jì)上,仍需不斷改良以提高其檢測(cè)效率。作者曾用半巢式PCR檢測(cè)70份支原體污染的樣本(主要為生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)),結(jié)果只檢出60份,說(shuō)明PCR要應(yīng)用于工業(yè)檢測(cè)支原體,其首要因素是要提高檢測(cè)限。見(jiàn)2015年《生物制品學(xué)雜志》中的《中國(guó)生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)污染支原體類(lèi)型的分析及豬鼻支原體特異性檢測(cè)方法的初步建立》。

 

需要指出的是,對(duì)于工業(yè)藥廠,如要采用PCR方法進(jìn)行支原體污染的檢查,如方法需要驗(yàn)證,可使用minerva biolabs提供的現(xiàn)成的支原體標(biāo)準(zhǔn)品。如簡(jiǎn)化驗(yàn)證,可使用現(xiàn)成的已經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的支原體PCRqPCR檢測(cè)試劑盒。并且支原體DNA需要經(jīng)過(guò)抽提才能進(jìn)行檢測(cè),以保證相應(yīng)的靈敏度。

下面小編介紹一下商業(yè)試劑盒的特點(diǎn):

 

1)使用靈活

    *  與幾乎所有商用循環(huán)儀兼容

    *  可選擇常規(guī)PCR或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR

 

2)高性能

    *  高耐用性、高靈敏度和高特異性(>100種支原體物種可檢測(cè))

    *  符合EP 2.6.7 / USP <71> / JP G3標(biāo)準(zhǔn)。提供內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照,

          用于過(guò)程監(jiān)測(cè)。有產(chǎn)品驗(yàn)證報(bào)告

 

3)使用方便

   *  預(yù)先分裝PCR mix25個(gè)反應(yīng)),保證長(zhǎng)期穩(wěn)定性

   *  組分為凍干粉形式,使運(yùn)輸與存儲(chǔ)更簡(jiǎn)單

   *  探針檢測(cè),結(jié)果清晰(qPCR

 

可考慮的標(biāo)準(zhǔn)品需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格標(biāo)定。需考慮有聲譽(yù)和質(zhì)控報(bào)告的標(biāo)準(zhǔn)品廠家。下面介紹某廠家標(biāo)準(zhǔn)品類(lèi)別如下:

配套用于過(guò)程驗(yàn)證和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品(EP2.6.7/USP<71>/JP G3):

*  10CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品,包括所有EPJP列舉的支原體物種

*  100CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

*  支原體和細(xì)菌基因組DNA(特異性驗(yàn)證用)

*  PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品(108拷貝DNA/管)

 

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